卵子體外催熟，女性不孕癥新希望？

近日《MolecularHumanReproduction》報(bào)道了Telfer課題組的最新工作：他們從10名剖腹產(chǎn)產(chǎn)婦體內(nèi)采集了87個(gè)卵泡，在實(shí)驗(yàn)室成功使其發(fā)育為成熟卵子。也就是說(shuō)，人類(lèi)卵子成熟可能不再單純依靠女性本體，卵子可以在體外逐漸成熟，意味著女性不孕癥新的治療方案或?qū)⒊霈F(xiàn)，為失去生育能力的女性帶來(lái)新希望。

【試管取精子方法】體內(nèi)卵泡發(fā)育過(guò)程是怎樣的？

卵泡發(fā)育是一個(gè)極為復(fù)雜的過(guò)程，主要包括卵巢周期前卵泡形成與發(fā)育和卵巢周期中卵泡發(fā)育與成熟。

卵巢周期前卵泡形成與發(fā)育

妊娠第3周，原始生殖細(xì)胞開(kāi)始向生殖嵴遷移，妊娠第6周完成遷移。此時(shí)生殖嵴內(nèi)的生殖細(xì)胞稱(chēng)為卵原細(xì)胞，對(duì)誘導(dǎo)卵巢發(fā)育至關(guān)重要。妊娠第8周卵原細(xì)胞開(kāi)始進(jìn)入第1次減數(shù)分裂前期，成為初級(jí)卵母細(xì)胞。每個(gè)初級(jí)卵母細(xì)胞與單層來(lái)自生發(fā)上皮或卵巢網(wǎng)的梭形顆粒細(xì)胞和單層基膜組成始基卵泡。

卵巢周期中卵泡發(fā)育和成熟

從青春期開(kāi)始，始基卵泡主要在下【試管取卵9個(gè)是不是很少】丘腦-垂體-卵巢軸的作用下進(jìn)一步發(fā)育形成始基卵泡-竇前卵泡-竇狀卵泡-排卵前卵泡，最后形成成熟卵泡。

始基卵泡發(fā)育遠(yuǎn)在月經(jīng)周期起始之前，從始基卵泡至形成竇前卵泡需9個(gè)月以上的時(shí)間，從竇前卵泡發(fā)育到成熟卵泡經(jīng)歷持續(xù)生長(zhǎng)期（1~4級(jí)卵泡）和指數(shù)生長(zhǎng)期（5~8級(jí)卵泡），共需85日，實(shí)際上跨越了3個(gè)月經(jīng)周期。

胎兒期的卵泡不斷閉鎖，出生時(shí)剩100萬(wàn)~200萬(wàn)個(gè)；兒童期多數(shù)卵泡退化，至青春期只剩下30萬(wàn)~40萬(wàn)個(gè)。女性一生中一般只有400~500個(gè)卵泡發(fā)育成熟并排卵，僅占總數(shù)的0.1%左右，足可見(jiàn)成熟卵泡的重要性。

卵泡發(fā)育是一個(gè)以形態(tài)變化為特征的生長(zhǎng)過(guò)程，同時(shí)伴隨著卵泡功能的分化。根據(jù)卵泡的形態(tài)、大小、生長(zhǎng)速度和組織學(xué)特征，可將其生長(zhǎng)過(guò)程分為以下幾個(gè)階段：

排卵多發(fā)生在下次月經(jīng)來(lái)潮前14日左右，卵子可由兩側(cè)卵巢輪流排出，也可由一側(cè)卵巢連續(xù)排出。卵子排出后，經(jīng)輸卵管傘部撿拾、輸卵管壁蠕動(dòng)以及輸卵管黏膜纖毛活動(dòng)等協(xié)同作用進(jìn)入輸卵管壺腹部與峽部連接處等待受精。排出的卵子若受精，方能完成第二次減數(shù)分裂，同時(shí)排出第二極體，形成受精卵。排卵后12~24小時(shí)卵子即失去受精能力。

實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)卵泡過(guò)程又是怎樣的？

研究人員在10名婦女行剖腹產(chǎn)手術(shù)時(shí)取下大小約為5mmx4mm（厚度不等）的新鮮卵巢皮質(zhì)【試管取了3個(gè)卵子】組織并放入提前準(zhǔn)備好的解剖介質(zhì)中保存運(yùn)輸，后進(jìn)行以下四個(gè)步驟：

Step1：組織制備和分離培養(yǎng)

切除受損的、出血的或過(guò)量的組織，把組織碎片扁平化并解剖成1的碎片。切除直徑＞40μm的卵泡，以確保碎片中的卵泡是原始的、過(guò)渡性的或初級(jí)的。特定條件下培養(yǎng)了8天后，卵泡數(shù)量達(dá)到要求。

Step2：卵泡分離和培養(yǎng)

對(duì)步驟1中得到的生長(zhǎng)濾泡解剖，選擇了具有完整基底膜的濾泡。在添加了人重組激活素A和rhFSH中進(jìn)一步培養(yǎng)8天，去除損傷或退化的濾泡。

Step3：卵母細(xì)胞–顆粒細(xì)胞復(fù)合體的分離和培養(yǎng)

在特定壓力下從完整健康的卵泡中提取卵母細(xì)胞–顆粒細(xì)胞復(fù)合體（COC），然后在含有激活素A和rhFSH的膜上培養(yǎng)4天后獲得含有直徑＞100μm卵母細(xì)胞的復(fù)合物。

Step4：卵母細(xì)胞的體外成熟（IVM）

將直徑100μm卵母細(xì)胞的復(fù)合物置于含F(xiàn)SH和LH的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后，可看到極體和卵丘細(xì)胞的擴(kuò)張。研究顯示中期II紡錘體和極體同時(shí)存在，證實(shí)了這些體外成長(zhǎng)的卵母細(xì)胞獲得了減數(shù)分裂能力。

被“催熟”的卵子能否發(fā)揮正常功能？

通過(guò)對(duì)比，實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)使卵泡成熟的時(shí)間大大縮短（此研究缺乏卵子的遺傳分析數(shù)據(jù)），在實(shí)驗(yàn)室培育卵子僅僅需要22天。人們不禁疑惑，被“催熟”卵子是否能正常行使功能，并且如果人工受精的話會(huì)不會(huì)存在一些未知的問(wèn)題呢？

京都大學(xué)的干細(xì)胞生物學(xué)家MitinoriSaitou（他的團(tuán)隊(duì)創(chuàng)建了用胚胎干細(xì)胞或干細(xì)胞構(gòu)建小鼠卵細(xì)胞的方法）指出，短時(shí)間人工催熟無(wú)法有效模擬體內(nèi)花費(fèi)數(shù)月時(shí)間才能達(dá)成的自然成熟過(guò)程。至于最后的卵細(xì)胞染色體能夠減半，他認(rèn)為：

卵細(xì)胞一分為二后形成的極體細(xì)胞正常來(lái)講體型較小，而這項(xiàng)工作得到的極體細(xì)胞體型異常的大。這【試管取了5個(gè)卵少不少】代表卵細(xì)胞可能還沒(méi)完全成熟。即使他們的報(bào)告是真的，我認(rèn)為它還有很多部分需要改進(jìn)。

Telfer解釋?zhuān)?/P>

卵細(xì)胞成熟更快是因?yàn)榘l(fā)育環(huán)境不含許多體內(nèi)抑制信號(hào)。發(fā)育速度和極體大小差異都不是卵細(xì)胞有問(wèn)題的證據(jù)。她和她的研究小組正在努力改進(jìn)這一過(guò)程，并希望得到英國(guó)人類(lèi)受精和胚胎學(xué)組織的批準(zhǔn)，讓他們嘗試對(duì)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的人類(lèi)卵子進(jìn)行受精，以創(chuàng)建人類(lèi)胚胎。

實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)卵子存在爭(zhēng)議。從現(xiàn)實(shí)角度看，卵子一直是困擾女性生育的重要問(wèn)題，Telfer科學(xué)家的研究意義是重大的，可為失去生育能力的婦女提供希望。從另一角度看，該卵子經(jīng)過(guò)受精發(fā)育后的胚胎是否健康又是值得研究思考的問(wèn)題。

正如愛(ài)丁堡大學(xué)Telfer所述，她和她研究小組還在努力改進(jìn)，實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)卵子之路應(yīng)用到現(xiàn)實(shí)還需要很長(zhǎng)的路要走，我們祈盼這項(xiàng)技術(shù)的進(jìn)一步成熟。